سیل سے متعلق تجربات کرنے والے دوست اکثر سیل فریزنگ کے طریقے استعمال کرتے ہیں۔ مختصراً، سیل منجمد اسٹوریج کا مقصد خلیات کو کم درجہ حرارت والے ماحول میں محفوظ کرنا ہے تاکہ طویل مدتی تحفظ کا مقصد حاصل کیا جا سکے۔ ٹرانسمیشن کے عمل کے دوران خلیات میں ایک خاص حد تک اتپریورتن ہوگی۔ اس بات کو یقینی بنانے کے لیے کہ خلیات اب بھی سیل کی آلودگی اور اتپریورتن کے معاملے میں استعمال ہو سکتے ہیں، کچھ خلیے عام طور پر منجمد کرنے کے لیے استعمال کیے جاتے ہیں۔
سیل کو منجمد کرنے کا اصول
سیل کے منجمد اور بحالی کے عمل میں ایک اصول "سست منجمد فیوژن" ہے تاکہ خلیوں کی زندگی کو زیادہ سے زیادہ محفوظ کیا جا سکے۔ سیدھے الفاظ میں، اسے منجمد اور ٹھنڈا ہونے پر سست ہونے کی ضرورت ہے، اور کم درجہ حرارت سے بازیافت ہونے پر اسے تیزی سے گرم کرنے کی ضرورت ہے۔ سست انجماد کی وجہ یہ ہے کہ اگر خلیات کو براہ راست انتہائی کم درجہ حرارت والے ماحول جیسے مائع نائٹروجن میں رکھا جائے تو خلیے ایک بڑا آئس کرسٹل بناتے ہیں، جو خلیوں کو نقصان پہنچاتا ہے۔
اگر آپ اسے آہستہ آہستہ منجمد کرتے ہیں، تو خلیات کی حفاظت کے مقصد کو حاصل کرنے کے لیے خلیوں کو آہستہ آہستہ پانی کی کمی ہو سکتی ہے۔ اس کے علاوہ، صحت یاب ہونے پر، یہ چھوٹے آئس کرسٹل کو بڑے آئس کرسٹل بننے سے روکنا بھی ہے، یعنی برف کے کرسٹل کے بھاری کرسٹل۔ لہذا، جب ہر کوئی عام طور پر سیل کو منجمد کرتا ہے، تو اس سے خلیات کو ہمیشہ نقصان کا سامنا کرنا پڑتا ہے، جس کا اثر منجمد ہونے کے مرحلے میں ہونے کا امکان ہوتا ہے۔
سیل کو منجمد کرنے کے کئی طریقے
دستی طریقہ: سیل منجمد عام طور پر مائع نائٹروجن میں محفوظ کیا جاتا ہے۔ دستی آپریشن کا طریقہ ریفریجریٹر میں میلان کو ٹھنڈا کرنا ہے۔ سیلز کو منجمد اسٹوریج ٹیوب میں محفوظ کریں، اور انہیں 4 ڈگری سینٹی گریڈ، -20 ڈگری سینٹی گریڈ، -80 ڈگری سینٹی گریڈ کے ریفریجریٹر ماحول میں رکھیں۔ مائع نائٹروجن میں منتقل ہونے سے پہلے 24 گھنٹے -80 ڈگری سینٹی گریڈ پر منجمد۔ دستی کولنگ کے لیے دیگر استعمال کی اشیاء کے اضافی سپلیمنٹس کی ضرورت نہیں ہوتی۔ اسے دستی طور پر چلایا جا سکتا ہے۔ یہ سب سے آسان ہے، لیکن یہ آسان نہیں ہے. اصل آپریشن مشکل ہے۔ اور اثر بہت اچھا نہیں ہے، کیونکہ ٹھنڈک کا یہ طریقہ ابھی بھی یکساں نہیں ہے، اور یہ ضروری نہیں کہ زیادہ نازک خلیوں پر لاگو ہو۔
گریڈینٹ کولنگ باکس: مارکیٹ میں فروخت ہونے والا گراڈینٹ کولنگ باکس خاص طور پر منجمد کرنے کے عمل کی یکساں کولنگ میں استعمال ہوتا ہے۔ ٹھنڈک کی رفتار عام طور پر -1 ڈگری/منٹ ہوتی ہے۔ منجمد سٹوریج ٹیوب کو گریڈینٹ کولنگ باکس میں ڈالیں، اور گراڈینٹ کولنگ باکس کو براہ راست ریفریجریٹر کے ماحول میں -80 ڈگری سینٹی گریڈ کے دستی گریڈینٹ آپریشن کے بغیر رات گزارنے کے لیے رکھیں۔ پھر ڈپازٹری ٹیوب کو نیچے کریں اور اسے مائع نائٹروجن میں ڈالیں۔ گریڈینٹ کولنگ بکس کے استعمال کا اثر بہتر ہے، کیونکہ مارکیٹ میں کمرشل کولنگ باکسز تقریباً یکساں کولنگ ریٹ کو یقینی بنا سکتے ہیں۔
مارکیٹ میں دو عام گریڈینٹ کولنگ بکس ہیں۔ isopropyl شامل کرنے کی ضرورت ہے، عام طور پر ایک PC باکس باڈی۔ استعمال کرتے وقت، آئسوپینول کو استعمال کرتے وقت باکس میں اسکیلنگ لائن میں شامل کریں۔ isopropanol گرمی کے ذخیرہ اور تقسیم کے لیے ایک کیریئر کے طور پر استعمال ہوتا ہے۔
ایک اور قسم کو آئسوپروپل، فومنگ کے ساتھ شامل کرنے کی ضرورت نہیں ہے، اور فریزر کو استعمال کے دوران براہ راست رکھا جا سکتا ہے، جو چلانے میں زیادہ آسان ہے۔
isopropanol کے کولنگ باکس کو کئی بار استعمال کرنے کے بعد مائع کو تبدیل کرنے کی سفارش کی جاتی ہے، لیکن چونکہ isopropanol ایک نقصان دہ مائع ہے، جو تجربات اور ماحول کو نقصان پہنچاتا ہے، اس لیے اسے عام طور پر کئی بار استعمال کیا جا سکتا ہے۔ تاہم، یہ یقینی بنانا ضروری ہے کہ مائع ایک خاص مقدار میں ہو۔
غیر پروگرام شدہ منجمد اسٹوریج: غیر پروگرام منجمد مائعات کا استعمال کریں جو مارکیٹ میں خریدے جاسکتے ہیں۔ روایتی منجمد مائع کے مقابلے میں، اندرونی جزو آئس کرسٹل کے خلیوں کو پہنچنے والے نقصان کو کم کر سکتا ہے، تاکہ ٹھنڈا ہونے کے لیے میلان کو استعمال کرنے کی ضرورت نہ ہو، اور نہ ہی اس کے لیے تدریجی کولنگ باکس کی ضرورت ہو۔ منجمد اسٹوریج کو براہ راست ریفریجریٹر کے ماحول میں -80 ڈگری سینٹی گریڈ کے اندر رکھا جا سکتا ہے۔
بہت سے سیل کے نمونے بہت قیمتی ہیں۔ ہمارے علاوہ، ہمیں تجربات کرتے وقت اسے استعمال کرنا چاہیے۔ آپ کو متعلقہ مصنوعات کے انتخاب میں زیادہ سے زیادہ اچھی مصنوعات کا انتخاب کرنے کی بھی ضرورت ہے۔ کوالیفائیڈ کوالٹی کے ساتھ منجمد سٹوریج ٹیوب کو منتخب کریں، منجمد کرنے کے لیے گریڈینٹ کولنگ ٹول استعمال کرنے کی کوشش کریں، اور معمولی کی وجہ سے چھوٹے نقصان سے بچنے کے لیے خلیات کو کم نقصان کی گارنٹی کو زیادہ سے زیادہ کریں۔
