بفر ریجنٹس

جب کوئی تجربہ ناکام ہوجاتا ہے تو ، کیا آپ نے کبھی مہنگے ریجنٹس یا پیچیدہ آلات پر انگلی کی نشاندہی کی ہے؟ لیکن بعض اوقات ، اصلی "مجرم" خاموشی سے کونے - میں خاموشی سے چھپا سکتا ہے جو بظاہر بفر ریجنٹ کی بظاہر عام بوتل ہے۔ اگرچہ یہ متضاد ہے ، لیکن یہ تجربے کی درستگی کو برقرار رکھنے کے لئے لائف لائن ہے۔ آج ، ہم اس "پوشیدہ سرپرست" کے راز کو ننگا کریں گے۔

ⅰ. بفر: یہ کیا ہے؟ لیبارٹری میں یہ ناگزیر کیوں ہے؟

سیدھے الفاظ میں ، ایک بفر ایک خاص حل سسٹم ہے جو اضافی تیزاب ، الکالی یا کمزوری کی تھوڑی مقدار کے اثرات کے خلاف مزاحمت کرسکتا ہے اور حل کی نسبتا مستحکم پییچ ویلیو کو برقرار رکھ سکتا ہے۔ یہ عام طور پر "شراکت داروں" کے ایک جوڑے پر مشتمل ہوتا ہے - ایک کمزور تیزاب اور اس کا اجتماعی اڈہ (یا ایک کمزور اڈہ اور اس کا کنجوجٹ ایسڈ) ، جیسے ایسٹک ایسڈ/سوڈیم ایسیٹیٹ (ہیک/اے سی-}) ، سوڈیم ڈائی ڈائی ڈائی ڈائی ڈائی ڈائی ڈائیڈیم فوسفیٹ/ڈسوڈیم ہائیڈروجن فوسفیٹ لیبارٹریوں میں عام۔
بنیادی قابلیت: پییچ کو مستحکم کریں اور تبدیلیوں کے خلاف مزاحمت کریں!
جب تھوڑی مقدار میں تیزابیت یا الکلائن مادوں کو حادثاتی طور پر تجربے میں متعارف کرایا جاتا ہے تو ، بفر میں "ساتھی" ایک موثر "ہائیڈروجن آئن گیٹ کیپر" کی طرح تیزی سے رد عمل کا اظہار کرے گا ، جو اسے جذب کرتا ہے یا اسے جاری کرتا ہے ، اس طرح حل کی پییچ ویلیو میں سخت اتار چڑھاو سے گریز کرتا ہے۔ یہ قابلیت بہت سے بائیو کیمیکل رد عمل کے ل essential ضروری ہے جو ایک مخصوص پییچ ماحول پر انحصار کرتے ہیں۔

ⅱ. لیبارٹری کا مرحلہ: ایک ناگزیر مرکزی کردار اور معاون کردار

1. بائیو کیمیکل تجربات کا "لائف سپورٹ سسٹم":
انزائم سرگرمی کی تحقیق:زیادہ تر خامروں میں صرف ایک تنگ پییچ رینج میں زیادہ سے زیادہ سرگرمی ہوتی ہے۔ بفرز (جیسے ٹریس - HCl ، PBS) قابل اعتماد نتائج کو یقینی بنانے کے لئے انزائم رد عمل کے لئے مستحکم "ورک بینچ" فراہم کرتے ہیں۔
پروٹین طہارت اور تجزیہ:سیل لیسس ، کرومیٹوگرافک علیحدگی (آئن ایکسچینج ، وابستگی کرومیٹوگرافی) سے الیکٹروفورسس (جیسے ایس ڈی ایس - صفحہ) ، پروٹین کرسٹاللائزیشن اور اسٹوریج تک ، ہر مرحلے میں پروٹین کی ساخت ، چارج اور گھلنشیلتا کو برقرار رکھنے کے لئے ایک مخصوص پییچ کے ساتھ بفر کی ضرورت ہوتی ہے اور عدم استحکام یا بارش کو روکتا ہے۔
نیوکلیک ایسڈ ہیرا پھیری:پی سی آر کا رد عمل ، ڈی این اے/آر این اے نکالنے ، انزائم ہاضمہ ، لیگیشن ، ہائبرڈائزیشن اور دیگر عمل پییچ کے لئے انتہائی حساس ہیں۔ عام طور پر استعمال ہونے والے بفر جیسے TE (TRIS - EDTA) نیوکلیک ایسڈ کی ساخت کو مستحکم کرسکتے ہیں اور انہیں نیوکلیز انحطاط سے بچاسکتے ہیں۔
2. سیل کلچر کا "لولی":سیل کلچر میڈیم (جیسے ڈی ایم ای ایم ، آر پی ایم آئی) خود ایک پیچیدہ بفر سسٹم ہے (اکثر سوڈیم بائک کاربونیٹ/کاربن ڈائی آکسائیڈ سسٹم پر انحصار کرتا ہے)۔ اضافی بفر (جیسے ہیپس) شامل کرنا خلیوں کو زیادہ مستحکم پییچ ماحول فراہم کرسکتا ہے ، خاص طور پر جب مائعات کو تبدیل کرنا ، مشاہدہ کرنا یا جب کاربن ڈائی آکسائیڈ کی تعداد میں اتار چڑھاؤ ہوسکتا ہے تو ، صحت مند خلیوں کی نشوونما کو یقینی بنانے کے ل .۔
3. تجزیاتی کیمسٹری کی "مستحکم قوت":
کرومیٹوگرافک علیحدگی:اعلی کارکردگی مائع کرومیٹوگرافی (ایچ پی ایل سی) اور آئن کرومیٹوگرافی (آئی سی) میں ، موبائل مرحلے کا پییچ علیحدگی کے اثر کے لئے کلیدی کنٹرول پیرامیٹر ہے ، اور بفرز (جیسے فاسفیٹس اور ایسیٹیٹس) علیحدگی کے عمل کی تولیدی صلاحیت کو یقینی بناتے ہیں۔
ٹائٹریشن تجزیہ:کچھ ٹائٹریشن رد عمل کو مستقل پییچ پر انجام دینے کی ضرورت ہے یا جب ایک مخصوص پییچ پہنچ جاتا ہے تو آخری نقطہ کی نشاندہی کرنے کی ضرورت ہوتی ہے ، اور بفر مستحکم کردار ادا کرتا ہے۔
معیاری حل کی تیاری:بہت سے معیاری حلوں کی پییچ ویلیو کو عین مطابق کنٹرول کرنے کی ضرورت ہے ، اور بفر اس کی بنیاد ہیں۔

ⅲ. انتخاب اور استعمال: بہت زیادہ علم

صحیح بفر سسٹم کا انتخاب کریں:
پی کے اے کی قیمت کلید ہے:بفر کی موثر بفرنگ رینج عام طور پر اس کے PKA ± 1 کی قیمت کی حد میں ہوتی ہے۔ اس بات کا یقین کر لیں کہ آپ جس ورک پییچ کی ضرورت ہے اس کے قریب پی کے اے ویلیو کے ساتھ بفر کا انتخاب کریں! مثال کے طور پر ، فاسفیٹ (پی کے اے ~ 7.2) اکثر غیر جانبدار پییچ رینج میں استعمال ہوتا ہے ، اور ٹرس (پی کے اے ~ 8.1) اکثر الکلائن میں استعمال ہوتا ہے۔
مطابقت:اس پر غور کریں کہ آیا بفر کے اجزاء آپ کے تجرباتی رد عمل میں مداخلت کرتے ہیں (جیسے فاسفیٹ کچھ فاسفوریلیشن اسٹڈیز میں مداخلت کرسکتا ہے ، اور بوریٹ شکر کے ساتھ رد عمل کا اظہار کرسکتا ہے)۔
آئنک طاقت اور درجہ حرارت:آئنک طاقت انزائم کی سرگرمی ، گھلنشیلتا ، وغیرہ کو متاثر کرتی ہے۔ درجہ حرارت کی تبدیلیوں سے بفرز جیسے پی کے اے کی قیمت کو نمایاں طور پر متاثر کیا جاسکتا ہے (TRIS میں تقریبا -0.031/ ڈگری کا ایک بڑا پی کے اے درجہ حرارت گتانک ہے)۔

ⅳ. عام بفروں کی فہرست

1. پی بی ایس بفر سیریز

پی بی ایس بفر 1 × (پی ایچ 7.4) ، پی بی ایس بفر 10 × (پی ایچ 7.4) ، پی بی ایس فاسفیٹ پاؤڈر (بغیر کیلشیم اور میگنیشیم آئنوں کے): سیل کلچر کے تجربات میں خلیوں کو دھونے (جیسے ثقافت کے میڈیم کو تبدیل کرنے سے پہلے) ؛ امیونولوجی تجربات میں اینٹی باڈیز کو کم کرنا اور ایلیسا پلیٹوں کو دھونے ؛ پروٹین/نیوکلیک ایسڈ کے تجربات وغیرہ میں آسٹمک پریشر اور پییچ استحکام کو برقرار رکھنا۔
ڈی پی بی ایس بفر (بغیر کیلشیم اور میگنیشیم کے) ، ڈی پی بی ایس فاسفیٹ پاؤڈر (کیلشیم اور میگنیشیم آئنوں کے بغیر): سیل کے تجربات میں فلو سائٹوومیٹری ، سیل ہاضمہ کے بعد دھونے (انزائم سرگرمی میں کیلشیم اور میگنیشیم میں مداخلت سے بچنے کے لئے)۔ خامروں کو کم کرنا یا آئن - انوولر بیالوجی (جیسے کچھ پی سی آر رد عمل) میں حساس تجربات وغیرہ کا انعقاد کرنا۔
پی بی ایس ٹی بفر (1 ×) ، پی بی ایس ٹی بفر (10 ×): مغربی بلاٹ یا امیونو ہسٹو کیمسٹری میں روکتے اور دھونے کے لئے استعمال کیا جاتا ہے ، غیر ضروری پابند ، وغیرہ کو کم کرنا وغیرہ۔

2. ٹی بی ایس بفر سیریز

ٹی بی ایس بفر (1 ×) ، ٹی بی ایس بفر (10 ×): امیونولوجی تجربات میں پی بی ایس بفر کو تبدیل کریں (کچھ اینٹی باڈی پابند کے ساتھ فاسفیٹ مداخلت سے بچنے کے لئے) ؛ پروٹین کے تجربات وغیرہ میں الکلائن پییچ ماحول کو مستحکم کریں۔

3. HBSS بفر سیریز
ایچ بی ایس ایس بفر (کیلشیم اور میگنیشیم فری ، فینول ریڈ فری)/ہانک کا بفر (کیلشیم اور میگنیشیم فری): سیل سے علیحدگی اور سیل تجربات (جیسے فلو سائٹومیٹری) میں سنٹرفیوگل دھونے ؛ مختصر - ٹرم سیل مینٹیننس (جیسے براہ راست سیل امیجنگ) ، وغیرہ۔ HBSS بفر (کیلشیم اور میگنیشیم فری ، فینول ریڈ فری): سیل کلچر میں سیل میٹابولک سرگرمی برقرار رکھیں (سگنل ٹرانزیکشن میں کیلشیم اور میگنیشیم حصہ لیتے ہیں)۔ سیل ہجرت/حملے کے تجربات۔

4. ٹی بفر سیریز
ٹی بفر (1 ×) ، ٹی بفر (10 ×): ڈی این اے/آر این اے کو تحلیل اور اسٹور کریں (ٹریس پییچ کو برقرار رکھتا ہے ، ای ڈی ٹی اے نیوکلیس کی سرگرمی کو روکنے کے لئے دھات کے آئنوں کو چیلیٹ کرتا ہے) ؛ پی سی آر ، ترتیب اور دیگر تجربات کے لئے ڈی این اے کو کمزور کریں۔

5. الیکٹروفورسس بفر سیریز
ٹی اے ای بفر (1 ×): روایتی ڈی این اے ایگروز جیل الیکٹروفورسس (کم ریزولوشن ، بڑے ڈی این اے کے ٹکڑوں کے لئے موزوں)۔ ٹیب بفر (1 ×) ، ٹیب بفر (10 ×): اعلی - ریزولوشن ڈی این اے/آر این اے الیکٹروفورسس (جیسے چھوٹے ٹکڑے یا پولی کریلیمائڈ جیل الیکٹروفورسس) ؛ طویل - ٹرم الیکٹروفورسس (بفرنگ کی صلاحیت TAE سے بہتر ہے)۔

6. مغربی بلٹ تجربہ بفر سیریز
ویسٹرن بلٹ ٹرانسفر بفر (10 ×): بفر پروٹین کو جیل سے جھلی (جیسے پی وی ڈی ایف جھلی) میں منتقل کرنے کے لئے استعمال ہوتا تھا ، جس میں ٹرائس ، گلیسین اور میتھانول شامل تھے۔
ٹرس - HCl بفر (1mol/L ، ph6.8): SDS کی تیاری - صفحہ مرتکز جیل ، وغیرہ۔
ٹرس - HCl بفر (1.5mol/L ، ph8.8): SDS - صفحہ علیحدگی جیل کی تیاری ، وغیرہ۔

7. معیاری پییچ بفر سیریز
پی ایچ =4.00/6.86/9.18 بفر (تیار 250 ملی لٹر): پی ایچ میٹر کیلیبریٹنگ کے لئے معیاری حل (جیسے پی ایچ 6.86 غیر جانبدار معیار ہے ، پی ایچ 4.00 اور 9.18 تیزابیت اور الکلائن معیارات ہیں)۔

بفر ریجنٹس کسی بھی طرح لیبارٹری میں بنیادی معاون کردار نہیں ہیں۔ ان کی بنیادی قدر ایک عین مطابق اور مستحکم پروٹون ماحول فراہم کرنے میں مضمر ہے ، جو تھرموڈینیٹک توازن اور زیادہ تر بائیو کیمیکل رد عمل کی متحرک شرح کو برقرار رکھنے کے لئے سنگ بنیاد ہے۔ انزائم فعال سائٹوں کے مائکرو ماحولیات کے ضابطے سے ، بائیووماکروومولیکولس کے تعمیری استحکام کی ضمانت تک ، ٹرانسمیبرن آئن میلان کی بحالی تک ، بفر سسٹم کی پییچ بفرنگ کی گنجائش تجرباتی اعداد و شمار کی تکرار اور قابل اعتبار کے لئے ایک ناگزیر لازمی ہے۔ بیک مین آپ کو آپ کے سائنسی تحقیقی سفر پر لے جائے گا۔

ہنان بیکمام ہولڈنگ کمپنی ، لمیٹڈ

ویب سائٹ: www.bkmbio.com

ای میل: info@bkmbio.com