مائکروبیل علم جو آپ چاہتے ہیں۔
مائکروجنزم چھوٹے جانداروں کا ایک گروپ ہیں جو فطرت میں وسیع پیمانے پر موجود ہیں اور ننگی آنکھ سے پوشیدہ ہیں اور ان کو آپٹیکل مائکروسکوپ یا الیکٹران مائکروسکوپ کی مدد سے سینکڑوں، ہزاروں یا دسیوں ہزار بار بڑھایا جانا چاہیے۔ ان میں چھوٹے سائز، سادہ ساخت، تیزی سے تولید، آسان تغیر اور ماحول کے مطابق ڈھالنے کی مضبوط صلاحیت کے فوائد ہیں۔
مائکروجنزموں کی درجہ بندی:
مائکروجنزم کی بہت سی قسمیں ہیں، کم از کم 100 سے زیادہ،000 قسم کے۔ ان کی ساخت کے مطابق کیمیائی ساخت اور رہنے کی عادات اور دیگر اختلافات کو تین زمروں میں تقسیم کیا جا سکتا ہے۔
یوکرائیوٹک مائکروبیل سیل نیوکلئس میں اعلی درجے کی تفریق ہوتی ہے، بشمول جوہری جھلی، نیوکلیولس اور کروموسوم؛ سائٹوپلازم میں مکمل آرگنیلز ہوتے ہیں (جیسے اینڈوپلاسمک ریٹیکولم، رائبوزوم اور مائٹوکونڈریا وغیرہ)۔ پھپھوندی کا تعلق اس قسم کے مائکروجنزم سے ہے۔
پروکیریوٹک مائکروبیل خلیوں میں جوہری تفریق کم ہوتی ہے، صرف قدیم نیوکلیوپلازم، کوئی جوہری جھلی اور نیوکلیولس نہیں؛ organelles بہت مکمل نہیں ہیں. اس طرح کے مائکروجنزموں کی بہت سی انواع ہیں، جن میں بیکٹیریا، اسپیروکیٹس، مائکوپلاسما، رکیٹشیا، کلیمیڈیا اور ایکٹینومیسیٹس شامل ہیں۔
سیلولر مائکروجنزموں کے پاس کوئی مخصوص سیل ڈھانچہ نہیں ہے اور توانائی پیدا کرنے کے لیے کوئی انزائم سسٹم نہیں ہے، اور یہ صرف زندہ خلیوں میں بڑھ سکتے ہیں اور دوبارہ پیدا کر سکتے ہیں۔ وائرس اس قسم کے مائکروجنزم سے تعلق رکھتے ہیں۔
مائکروجنزموں کی علیحدگی اور تطہیر
ایک سے زیادہ انواع پر مشتمل مائکروبیل کلچر کو مخلوط کلچر کہا جاتا ہے۔ اگر کالونی کے تمام خلیے ایک پیرنٹل سیل سے اخذ کیے جاتے ہیں، تو کالونی کو خالص ثقافت کہا جاتا ہے۔ بیکٹیریل پرجاتیوں کی شناخت میں، استعمال ہونے والے مائکروجنزموں کو عام طور پر خالص ثقافتوں کی ضرورت ہوتی ہے. خالص ثقافت حاصل کرنے کے عمل کو علیحدگی اور تطہیر کہا جاتا ہے، اور اس کے بہت سے طریقے ہیں۔
1. پلیٹ طریقہ ڈالو
سب سے پہلے، مائکروبیل سسپینشن کو ایک سیریز میں پتلا کیا جاتا ہے، اور اس کی ایک خاص مقدار کو تقریباً 40-50 ڈگری پر برقرار تحلیل شدہ غذائی اجار میڈیم کے ساتھ مکمل طور پر ملایا جاتا ہے، اور پھر اس مرکب کو جراثیم سے پاک پیٹری ڈش میں ڈالا جاتا ہے۔ مضبوطی کے بعد، پلیٹ کو ایک مستقل چیمبر میں الٹا سینک دیا گیا تھا۔ ایک کالونی بنانے کے لیے ایک سیل کو ضرب دیا جاتا ہے، ایک ہی کالونی کو معطل کرنے کے لیے لیا جاتا ہے، اور ایک خالص ثقافت حاصل کرنے کے لیے مذکورہ بالا اقدامات کو کئی بار دہرایا جاتا ہے۔
2. کوٹنگ فلیٹ پلیٹ طریقہ
سب سے پہلے، مائکروبیل سسپنشن کو ٹھیک طرح سے پتلا کیا جاتا ہے، اور اس کی ایک خاص مقدار کو جراثیم سے پاک غذائی اجزا کی پلیٹ پر رکھا جاتا ہے جو ٹھوس ہو چکی ہوتی ہے، اور پھر اس کو جراثیم سے پاک گلاس اسپاتولا کے ساتھ درمیانے درجے کی سطح پر یکساں طور پر پھیلا دیا جاتا ہے۔ مستقل درجہ حرارت پر انکیوبیشن کے ذریعہ ایک واحد کالونی حاصل کی جاسکتی ہے۔
3. پلیٹ سکرائبنگ کا طریقہ
مائکروجنزموں کو الگ تھلگ کرنے کا سب سے آسان طریقہ سٹریکنگ ہے۔ جراثیم سے پاک لوپ کا استعمال کرتے ہوئے پلیٹ پر کلچر کی تھوڑی سی مقدار کو کھینچیں۔ لکھنے کے بہت سے طریقے ہیں۔ عام اسکرائبنگ کے طریقے جن میں ایک کالونی ظاہر ہونے کا زیادہ امکان ہوتا ہے وہ ہیں سلیش طریقہ، وکر کا طریقہ، مربع طریقہ، تابکاری کا طریقہ، اور فور گرڈ طریقہ۔ جب انوکولیشن لوپ درمیانے درجے کی سطح پر پیچھے کی طرف جاتا ہے تو، انوکولیشن لوپ پر موجود بیکٹیریل مائع آہستہ آہستہ پتلا ہو جاتا ہے، اور آخر میں کھینچی ہوئی لکیر پر ایک خلیہ بکھر جاتا ہے۔ ثقافت کے بعد، ہر سیل ایک کالونی میں بڑھتا ہے.
4. افزودگی ثقافت کا طریقہ
افزودگی ثقافت کے طریقہ کار کا طریقہ اور اصول بہت آسان ہیں۔ ہم ایسے حالات پیدا کر سکتے ہیں جو صرف مطلوبہ جرثوموں کو بڑھنے دیں، اور ان حالات میں مطلوبہ جرثومے مؤثر طریقے سے دوسرے جرثوموں کا مقابلہ کر سکتے ہیں اور نشوونما کی صلاحیت کے لحاظ سے دوسرے جرثوموں سے کہیں زیادہ ہیں۔ اگر کچھ واجب پرجیویوں کو الگ تھلگ کرنا ہے تو، بڑی تعداد میں بڑھنے کے لیے نمونوں کو متعلقہ حساس میزبان سیل کی آبادی میں ٹیکہ لگایا جانا چاہیے۔ خالص پرجیوی بیکٹیریا بار بار بوائی سے حاصل کیا جا سکتا ہے۔
5. اینیروبک طریقہ
لیبارٹری میں، کچھ انیروبک بیکٹیریا کو الگ کرنے کے لیے، اصل میڈیم پر مشتمل ایک ٹیسٹ ٹیوب کو کلچر برتن کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے، اور ٹیسٹ ٹیوب کو ابلتے ہوئے پانی کے غسل میں کئی منٹ تک گرم کیا جا سکتا ہے تاکہ میڈیم میں تحلیل شدہ آکسیجن کو باہر نکالا جا سکے۔ . اس کے بعد اسے تیزی سے ٹھنڈا اور ٹیکہ لگایا جاتا ہے۔ ٹیکہ لگانے کے بعد، میڈیم کو ہوا سے الگ کرنے کے لیے جراثیم سے پاک پیرافین کو میڈیم کی سطح پر شامل کیا گیا۔ دوسرا طریقہ یہ ہے کہ ٹیکہ لگانے کے بعد میڈیم میں گیس کو N2 یا CO2 سے تبدیل کریں، اور پھر ٹیسٹ ٹیوب کے منہ کو شعلے پر بند کر دیں۔ بعض اوقات کچھ انیروبک بیکٹیریا کو زیادہ موثر طریقے سے الگ کرنے کے لیے، الگ تھلگ نمونے کو درمیانے درجے پر ٹیکہ لگایا جا سکتا ہے، اور پھر پیٹری ڈش کو مکمل طور پر سیل بند اینیروبک کلچر ڈیوائس میں رکھا جا سکتا ہے۔
6. سنگل سیل (یا واحد بیضہ) تنہائی کا طریقہ
یہ خالص ثقافت حاصل کرنے کے لیے ثقافت کے لیے مخلوط آبادی سے واحد خلیات یا واحد افراد کو براہ راست الگ تھلگ کرنے کے لیے مائکرو سیپریشن کا طریقہ اختیار کرنا ہے۔ بڑے مائکروجنزموں کے لئے، ایک فرد کو کیپلیری کا استعمال کرتے ہوئے نکالا جا سکتا ہے. نسبتاً چھوٹے افراد والے مائکروجنزموں کے لیے، ایک مائیکرو مینیپلیٹر کو خالص کلچر حاصل کرنے کے لیے خوردبین کے نیچے کیپلیری یا مائیکرونیڈل، ہک، لوپ وغیرہ کے ساتھ واحد مائکروبیل خلیات یا بیضوں کو چننے کی ضرورت ہوتی ہے۔ سنگل سیل علیحدگی کا طریقہ آپریشن ٹیکنالوجی پر نسبتاً زیادہ ضروریات رکھتا ہے۔
مائکروبیل ثقافت
1. ثقافت کے دوران آکسیجن کی ضرورت کے مطابق، اسے دو قسموں میں تقسیم کیا جا سکتا ہے: ایروبک کلچر اور اینیروبک کلچر۔
ایروبک کلچر: جسے "ایروبک کلچر" بھی کہا جاتا ہے۔ کہنے کا مطلب یہ ہے کہ جب اس مائکروجنزم کو کاشت کیا جاتا ہے، تو اسے آکسیجن کی ضرورت ہوتی ہے، ورنہ یہ اچھی طرح سے بڑھ نہیں پائے گا۔ لیبارٹری میں، روئی کے پلگ کے ذریعے باہر سے جراثیم سے پاک ہوا حاصل کرکے ترچھا کلچر حاصل کیا جاتا ہے۔ ایرلن میئر فلاسک میں زیادہ تر مائع کلچر کو شیکر سے ہلایا جاتا ہے، تاکہ باہر کی ہوا مسلسل بوتل میں داخل ہو سکے۔
اینیروبک کلچر: اسے "انایروبک کلچر" کے نام سے بھی جانا جاتا ہے۔ ایسے مائکروجنزموں کو کاشت میں حصہ لینے کے لیے آکسیجن کی ضرورت نہیں ہوتی۔ انیروبک مائکروجنزموں کی کاشت کے عمل میں، سب سے اہم نکتہ درمیانے درجے میں آکسیجن کو ہٹانا ہے۔
2. میڈیم کی جسمانی حالت کے مطابق، اسے دو قسموں میں تقسیم کیا جا سکتا ہے: ٹھوس ثقافت اور مائع ثقافت۔
ٹھوس ثقافت: یہ تناؤ کو ڈھیلے اور غذائیت سے بھرپور ٹھوس میڈیم میں ٹیکہ لگانے اور مناسب حالات میں مائکروجنزموں کو کلچر کرنے کا طریقہ ہے۔
مائع ثقافت: تجربات میں، مائع ثقافت مائکروجنزموں کو تیزی سے ضرب اور ثقافتوں کی ایک بڑی تعداد حاصل کر سکتے ہیں. بعض حالات میں، یہ مائکروجنزموں کے لیے بیکٹیریا کو منتخب کرنے اور ان کی افزودگی کا ایک مؤثر طریقہ بھی ہے۔
BKMAM بائیوٹیک مائکروبیل کلچر کے لیے متعلقہ لیبارٹری استعمال کی اشیاء فراہم کرتا ہے:
ڈسپوزایبل پلاسٹک گول/مربع پیٹری ڈشز:
اعلی شفافیت پولی اسٹیرین مواد (PS)؛
l سطح ہموار اور چپٹی ہے، اور خوردبین کے مشاہدے کے تحت خلیات کی کوئی نظری مسخ نہیں ہے۔
l اسٹیکنگ ڈیزائن اسٹیکنگ اور اسٹوریج کو آسان بناتا ہے۔
l ایتھیلین آکسائیڈ نس بندی (EO)؛
l پہننے اور سنکنرن کے خلاف مزاحمت۔
ڈسپوزایبل پلاسٹک انوکولیشن اسٹک/لوپ:
پولیسٹیرین مواد (PS)؛
انسداد آلودگی، Endotoxin، DNase، RNase اور پائروجن سے پاک؛
آزاد پیکیجنگ کو جراثیم سے پاک کیا گیا ہے۔
عمدہ کاریگری اور مکمل وضاحتیں؛
ڈسپوزایبل پلاسٹک سیل اسپریڈر، بیکٹیریا پھیلانے والا:
پولیسٹیرین مواد (PS)؛
انسداد آلودگی، Endotoxin، DNase، RNase اور پائروجن سے پاک؛
ایل کے سائز کا ڈیزائن، استعمال میں آسان؛
ایک بار استعمال، ہلکا اور آسان۔
سٹینلیس سٹیل / ڈسپوزایبل جراثیم سے پاک تفصیلات پلیٹیں:
سٹینلیس سٹیل کی تفصیلات کی پلیٹ سٹینلیس سٹیل سے بنی ہے، اور ڈسپوزایبل تفصیلات کی پلیٹ فوڈ گریڈ پولی پروپلین (PP) سے بنی ہے۔
انسداد آلودگی، Endotoxin، DNase، RNase اور پائروجن سے پاک؛
سمیرنگ ایریا سختی سے معیاری ہے۔
تصریح پلیٹ کا ایک طرف ایک ہینڈل سے لیس ہے، جو کام کرنا آسان ہے۔
نمونے لینے کی ثانوی آلودگی اور نتائج میں غلطی سے بچنے کے لیے جراثیم سے پاک مہر بند واحد پیکج
کراس آلودگی سے بچنے اور کام کا بوجھ کم کرنے کے لیے ایک بار استعمال کریں۔
ہمارے ساتھ تعاون کرنے میں خوش آمدید
مخلص
مائیکل پینگ
michael@bkmbio.com