سیل کلچر کے لیے بنیادی شرائط
1. مناسب سیل کلچر میڈیم
وٹرو میں سیل کی افزائش اور پھیلاؤ کے لیے موزوں سیل کلچر میڈیم سب سے اہم شرائط میں سے ایک ہے۔ کلچر میڈیم سیل کی نشوونما اور پھیلاؤ کو فروغ دینے کے لیے نہ صرف سیل کی غذائیت اور بنیادی مادے فراہم کرتا ہے بلکہ مہذب خلیوں کی نشوونما اور تولید کے لیے ایک زندہ ماحول بھی فراہم کرتا ہے۔
2. اعلیٰ معیار کا سیرم
فی الحال، زیادہ تر مصنوعی میڈیا کو سیرم کے اضافے کی ضرورت ہوتی ہے۔ سیرم سیل کلچر میڈیم میں سب سے اہم اجزاء میں سے ایک ہے، جس میں مختلف قسم کے نمو کے عوامل اور سیل کی نشوونما کے لیے درکار دیگر غذائی اجزاء شامل ہیں۔
3. مسلسل سیل کی ترقی کا درجہ حرارت
مہذب خلیوں کی بھرپور نشوونما کو برقرار رکھنے کے لیے، ایک مستقل اور مناسب درجہ حرارت ہونا چاہیے۔
4. مناسب گیس ماحول
پستان دار خلیوں کی بقا کے لیے گیس ایک ضروری شرط ہے، اور مطلوبہ گیسیں بنیادی طور پر آکسیجن اور کاربن ڈائی آکسائیڈ ہیں۔
5. سیل کلچر کا درجہ حرارت
مہذب خلیوں کی بھرپور نشوونما کو برقرار رکھنے کے لیے، ایک مستقل اور مناسب درجہ حرارت ہونا چاہیے۔ مختلف قسم کے خلیوں کی ثقافت کے درجہ حرارت کے لیے مختلف تقاضے ہوتے ہیں۔ انسانی خلیے کی ثقافت کے لیے معیاری درجہ حرارت 36.5 ڈگری ± 0.5 ڈگری ہے۔ درجہ حرارت کی اس حد سے انحراف خلیات کے نارمل میٹابولزم کو متاثر کرے گا اور یہاں تک کہ مر جائے گا۔
6. مناسب گیس ماحول
میملین سیل کلچر کی بقا کے لیے گیس ضروری شرائط میں سے ایک ہے، اور مطلوبہ گیسیں بنیادی طور پر آکسیجن اور کاربن ڈائی آکسائیڈ ہیں۔ آکسیجن ٹرائی کاربو آکسیلک ایسڈ سائیکل میں حصہ لیتی ہے، خلیے کی نشوونما اور پھیلاؤ کے لیے توانائی پیدا کرتی ہے اور خلیوں کی نشوونما کے لیے درکار مختلف اجزاء کی ترکیب کرتی ہے۔
سیل کلچر کی عام آلودگی
1. بیکٹیریل آلودگی
بیکٹیریل آلودگی سب سے عام ہے۔ ایک بار جب آپریشن تھوڑا سا غلط ہو جاتا ہے، تو یہ سیل کی آلودگی کا سبب بنے گا۔ بیکٹیریل آلودگی کے بعد، یہ ریت کی سیاہ پتلی پٹیوں کے طور پر نظر آئے گا جب خوردبین کے نیچے دیکھا جائے گا۔ چھڑی کی شکل وغیرہ۔ دوسری بات یہ ہے کہ کلچر میڈیم پیلا اور گدلا ہو جاتا ہے اور پیٹری ڈش میں باریک ریت کی شکل کی تلچھٹ واضح طور پر دیکھی جا سکتی ہے، اور وقتاً فوقتاً ایک عجیب بو آتی ہے۔
2. کوکیی آلودگی
فنگل سے آلودہ کلچر کا محلول صاف اور شفاف ہے، جیسا کہ بیکٹیریل انفیکشن کے بڑے پھیلنے کی طرح نہیں، اس لیے اس کا جلد پتہ لگانا مشکل ہے۔ کبھی یہ خوردبین کے نیچے ایک تنت کی طرح لگتا ہے، کبھی یہ ایک مرجان کی طرح لگتا ہے، اور آہستہ آہستہ ایک بہت ہی پتلا سیاہ تنت بڑھے گا۔ یہ جب بہت دیر ہو جاتی ہے تو خلیات کو بچانا مشکل ہو جاتا ہے۔
3. سڑنا آلودگی
فنگل انفیکشن کے ساتھ مطابقت رکھتا ہے، کیونکہ ثقافت کا ذریعہ واضح ہے، فنگل آلودگی کا جلد پتہ لگانا مشکل ہے، جب اکثر بہت دیر ہو جاتی ہے۔ کلچر میڈیم میں فلوکولینٹ نجاست آہستہ آہستہ نمودار ہوئی، اور فلیمینٹس بڑے پیمانے پر تیرتی اشیاء خوردبین کے نیچے دیکھی جا سکتی ہیں، جیسے ہوا میں کیٹکنز۔ خلیے اب بھی بڑھ سکتے ہیں، لیکن وقت گزرنے کے ساتھ، خلیے خراب ہو جاتے ہیں اور بڑھنا بند ہو جاتے ہیں۔
4. Mycoplasma انفیکشن
ثقافت کا ذریعہ گندا ہو جاتا ہے۔ مائکوپلاسما کے خلیوں کو متاثر کرنے کے بعد، سائٹوپیتھک تبدیلیاں واضح نہیں ہوتیں، لیکن خلیے کی حالت خراب ہو جاتی ہے اور نشوونما سست ہو جاتی ہے۔ خوردبین کے نیچے چھوٹے سیاہ دھبے ہو سکتے ہیں، لیکن کلچر میڈیم عام طور پر گندا نہیں ہوتا ہے۔ خلیوں کے گزر جانے کے بعد، خلیے کے درمیان سیاہ دھبے نمودار ہوئے، خلیے خالی ہو گئے، اور بہت سے خلیے اپوپٹوس اور نیکروسس سے ملتے جلتے تھے۔ آخر کار، خلیات تیرتے اور مکمل طور پر مر گئے۔
سیل کی آلودگی کی روک تھام
اچھے اصول و ضوابط کا قیام سیل کی آلودگی کو کم کرنے میں ایک طویل سفر طے کر سکتا ہے۔ رسائی کے نظام، آپریٹنگ اصولوں اور روزانہ کے انتظام کے نظام سمیت.
رسائی کا نظام: عملہ اور مواد سمیت۔ عملے کو تربیت دینے کی ضرورت ہے اس سے پہلے کہ وہ خود کام کر سکیں، اور انہیں لیبارٹری میں داخل ہونے سے پہلے پہننے کی ضروریات کو پورا کرنا چاہیے، جیسے سفید کوٹ، آئسولیشن گاؤن، ماسک، دستانے وغیرہ۔ ضرورت کی اشیاء کے لیے، نان ڈسپوز ایبل اشیاء کو سختی سے استعمال کرنا چاہیے۔ جراثیم سے پاک اور جراثیم سے پاک، اور خریدی گئی اشیاء کو باقاعدہ اور قابل اعتماد چینلز سے خریدنے کی ضرورت ہے۔ استعمال سے پہلے نئے خریدے گئے سیلز کی جانچ اور تصدیق کی جانی چاہیے۔
آپریٹنگ تصریحات: معمول کی کارروائیوں کے لیے تصریحات مرتب کرنا بہتر ہے، اور لیبارٹری کے عملے کو آپریٹنگ تصریحات پر عمل کرنا چاہیے، جنہیں اپنی مرضی سے تبدیل نہیں کیا جا سکتا، اور لیبارٹری کے اہلکاروں کے لیے اچھی آپریٹنگ عادات کو بھی فروغ دینا چاہیے۔ مثال کے طور پر، پائپیٹ کی نوک کو چوسنے کے بعد، اسے دوسری بار درمیانے درجے میں نہیں بڑھایا جائے گا، اور درمیانے کی کافی مقدار میں ایک بار چوسا جائے گا۔ مائع شامل کرتے وقت، مائع کو زیادہ سے زیادہ معطلی میں شامل کیا جانا چاہئے، جو مائکوپلاسما آلودگی اور سیل کراس آلودگی کو مؤثر طریقے سے روک سکتا ہے۔ اس کے علاوہ، اگر ممکن ہو تو، ایک وقت میں صرف ایک سیل لائن چلائیں، اور یہ بہتر ہے کہ خلیات کے درمیان تھوڑا سا وقفہ ہو تاکہ کراس آلودگی سے بچا جا سکے۔
ڈیلی مینجمنٹ سسٹم: اس میں ماحولیات کے استعمال، صفائی اور دیکھ بھال کے اصول اور طریقے شامل ہیں اور استعمال کی جانے والی اشیاء، ری ایجنٹس وغیرہ۔ ری ایجنٹس اور استعمال کی اشیاء کی کھپت، انوینٹری اور خریداری کا انتظام بھی شامل ہے، بشمول دو سطحی انوینٹری مینجمنٹ سیل کے نمونے آلودگی کے ان ذرائع کے لیے جنہیں تلاش کرنا آسان نہیں ہے، یہ بہتر ہے کہ باقاعدگی سے جانچ کرائی جائے، خاص طور پر مائکوپلاسما آلودگی اور سیل کراس آلودگی۔
BKMAM Bio سیل کلچر کے لیے متعلقہ استعمال کی اشیاء فراہم کرتا ہے:
ڈسپوزایبل پلاسٹک گول/مربع پیٹری ڈشز:
اعلی شفافیت پولی اسٹیرین مواد (PS)؛
سطح ہموار اور چپٹی ہے، اور خوردبین کے مشاہدے کے تحت خلیات کی کوئی نظری مسخ نہیں ہے۔
اسٹیکنگ ڈیزائن اسٹیکنگ اور اسٹوریج کو آسان بناتا ہے۔
ایتھیلین آکسائیڈ نس بندی (EO)؛
پہننے اور سنکنرن کے خلاف مزاحمت۔
سیل کلچر ڈشز کا اعتدال پسند علاج:
پولیسٹیرین مواد (PS)؛
الیکٹران بیم نس بندی، کوئی پائروجن، کوئی زہر نہیں؛
ویکیوم پلازما سطح کا علاج، بہترین سیل آسنجن؛
سطح ہموار اور چپٹی ہے، اور خوردبین کے مشاہدے کے تحت خلیات کی کوئی نظری مسخ نہیں ہے۔
اسٹیک ایبل ڈیزائن اسٹیکنگ اور اسٹوریج کو آسان بناتا ہے۔
پلاسٹک سیل کلچر پلیٹیں:
پولیسٹیرین مواد (PS)؛
عام سیل کلچر کے لیے موزوں، غیر متواضع ٹریٹمنٹ پلیٹ کی قسم؛
کوئی پائروجن، کوئی زہریلا، جراثیم سے پاک؛
آسان آنسو کی قسم آزاد پیکیجنگ، کام کرنے کے لئے آسان؛
سیل کلچر پلیٹوں کا پابند علاج:
پولیسٹیرین مواد (PS)؛
ایڈیرینٹ ٹریٹمنٹ (TC ٹریٹمنٹ) پلیٹ کی قسم، ایڈرینٹ سیلز کی کلچر کے لیے موزوں ہے۔
کوئی پائروجن، کوئی زہریلا، جراثیم سے پاک؛
آسان آنسو کی قسم آزاد پیکیجنگ، کام کرنے کے لئے آسان؛
سب فلیٹ نیچے ہیں۔
سیل کلچر فلاسکس کا پابند علاج:
پولیسٹیرین مواد (PS)؛
الیکٹران بیم نس بندی، کوئی پائروجن، کوئی زہر نہیں؛
ویکیوم پلازما سطح کا علاج، بہترین سیل آسنجن؛
سانس لینے کے قابل احاطہ، جو گیس کے تبادلے کے لیے سازگار ہے اور مائکروجنزموں کو وہاں سے گزرنے سے روکتا ہے۔
اندرونی/بیرونی اسپن کریوویئلز:
100 فیصد خالص پولی پروپیلین مواد (پی پی)؛
15psi، 121 ڈگری نس بندی کا سامنا کر سکتا ہے؛
ٹیوب کی دیوار موٹی ہے، اور ٹیوب کے جسم میں پیمانے اور لکھنے کا علاقہ ہے؛
جکڑن کو یقینی بنانے کے لیے پائپ کور تھریڈ اور پائپ باڈی کے درمیان سلیکون کی انگوٹھی کی مہر ہے۔
کوئی DNase، کوئی RNase، کوئی پائروجن، کوئی اینڈوٹوکسین نہیں۔
